基金项目：真泥鳅鱼苗规模化人工生产技术研究
基金项目：本项目研究得到广东省扬帆计划培养高层次人才项目（陈金辉）（项目编号：201425）、清远市科技计划项目（项目编号：2015A004）和清远职业技术学院自然科学项目（项目编号：ZK13001）资助。
陈金辉等
泥鳅广泛分布在中国、日本、朝鲜、俄罗斯、印度及摩洛哥等国家 。在中国，除青藏高原外，泥鳅可在全国各地河川、沟渠、水田、池塘、湖泊及水库等天然淡水水域中生存，尤其在长江和珠江流域中下游分布较广，群体数量较大。泥鳅在分类上属鲤形目、鲤亚目、鳅科属，主要包括真泥鳅（Misgurnusanguillicaudati）（简称泥鳅或真鳅）、大鳞副泥鳅、花鳅、带纹沙鳅、北方条鳅等品种。
与大鳞副泥鳅相比，真泥鳅个体较大，最大个体体长可达30 cm，重量可达 100 g 以上，更耐低氧，生长速度快，营养价值更高 。广东，真泥鳅为野生泥鳅群体中的主要品种，也是广受市场欢迎的泥鳅品种。由于广东地区还没有鱼苗繁育场开展真泥鳅的规模化人工繁殖，养殖用真泥鳅苗主要采集自田野沟渠等，苗种质量规格不一，导致综合养殖效益不高。为满足本地养殖户开展真泥鳅养殖的需要，促进泥鳅养殖产业的可持续发展，有必要开展适合广东水土气候条件的真泥鳅苗种规模化繁育技术研究。
1 材料和方法
1.1 试验试剂
绒毛膜促性腺激素（HCG）购买自宁波市第二激素厂，规格为 10000 单位 / 支。
1.2 亲本及其培育
从清远地区的农贸市场购买自天然水体中捕捉的野生真泥鳅，选留体长 10 cm 以上、体重 10 g 以上且游动迅捷的雌雄个体用作亲本。
设亲本饲养池对亲本进行专池培育。专池使用生石灰（75 ～ 100 kg/ 亩）进行全池干法消毒，8 ～ 10 天后加入花生麸（15 ～ 20 kg/ 亩）肥水。待水色呈黄褐色或绿褐色，并经检测无毒后，放入选留的真泥鳅亲本（500 kg/ 亩），进行亲本强化培育。培育期间投喂粗蛋白含量为35%～38%的浮性鱼饲料（鲈鱼料等），投喂量为真泥鳅亲本总重量的 5% ～ 7%，每日早上（8 : 30 ～ 9 : 00）、下午（5 : 30 ～ 6 : 00）各投喂 1 次。每星期换水 1 次，每次换水量为水体总量的 1/4 左右。
1.3 亲本雌雄鉴别
亲本雌雄鉴别参照向冰和孔祥勇等的方法 。雄性真泥鳅个体体型偏小，腹部细长，胸鳍第二鳍条较其他鳍条更长。雌性真泥鳅个体体型偏大，腹部肥大，胸鳍前端圆钝，展开时呈扇形。
1.4 人工催产
人工催产参照孔祥勇和叶东容等的方法。春秋季节，池塘水温达到 20℃以上时 ，挑选性成熟的雌雄真泥鳅用于催产（雌雄比为 1 : 2）。绒毛膜促性腺激素注射量为每 10 g 体重注射150 ～ 600 IU，雄性真泥鳅剂量减半，每尾真泥鳅注射液给量不超过 500 μL。注射激素后，将亲本饲养在 20℃～ 22℃的水中。
1.5 人工受精
注射催产激素10 h后，每隔2 h取5条雌性真泥鳅挤压腹部，当有卵子能顺畅流出时进行湿法授精。湿法授精参照孔祥勇的方法 ，并做以下改动：取雄性真泥鳅的精巢，使用剪刀剪碎，并在研钵中研磨至无肉眼可见精巢组织。使用适量 0.75%NaCl 溶液悬浮研碎的精巢组织，将精巢悬浮液缓慢导入装有卵子的干净瓷碗中，并用干净的羽毛匀速搅拌 3 min 左右，使精液和卵子混匀，充分受精。
1.6 人工孵化
将受精后的卵子使用 20℃～ 22℃的井水漂洗 2 ～ 3 次，去掉血水。然后将受精卵均匀撒布到孵化池中的“毛毛虫”鱼巢上，启动长管微孔增氧，在20℃～22℃的水中进行流水孵化，如图1所示。
图 1 为粘附在鱼巢上的受精卵进行微孔增氧
1.7 动物饵料培育和捕捞
1.7.1 卤虫无节幼体培育。人工配置 15 ～ 20 ppm 咸淡水，使用 NaOH 溶液调节咸淡水 pH 值到 8.0 ～ 9.0 之间。在配置好的咸淡水中接种卤虫卵 ( 购买自格尔木润泽生物科技开发有限公司 )，并在日光灯照射、常温下进行充气培养。培养 15 h 后，每隔 1 h 显微镜镜检 1 次，至卤虫进入无节幼体阶段时收集卤虫无节幼体阶段幼虫，用于真泥鳅鱼苗饲喂。
1.7.2 水蚤培育。水温在 18℃以上时，在水蚤早晚聚集时，使用 60 目浮游动物网从富营养水体中采集水蚤，用作蚤种。然后将蚤种接种到已施足基肥（每立方米水体施尿素 30 g、酵母 20 g）的土池中，之后每隔 10 天追肥 1 次，每立方米水体施尿素 15 g、酵母 10 g。经 15 天培育后，可每天捞取总量10% ～ 20% 的水蚤作为鱼苗饲料。
1.8 鳅苗培育
使用孵化池进行鳅苗培育。在孵化池中，待卵黄被吸收后，给鳅苗投喂开口饵料。开口饵料为肥水（土池培育，下同） 鸡蛋黄（煮熟的鸡蛋黄使用 4 层纱布进行过滤）、肥水 卤虫幼虫或肥水 水蚤。在孵化池中饲喂 7 天后，将真泥鳅鱼苗转移至已做清塘处理的土池中，进行鳅种培育。
1.9 统计分析
1.9.1 催产率分析。注射 HCG 后 10 h，每隔 2 h 随机取样 5 条雌性真泥鳅，轻轻挤压腹部，如检测到 3 条以上真泥鳅的卵子能顺畅流出，则开始进行人工受精。取雌性真泥鳅挤压腹部，记录卵留出情况，顺畅流出为催产成功，不能顺畅流出为催产失败，然后计算催产率。
1.9.2 受精率分析。人工受精 1 h 后，从鱼巢中刷取卵子，用清水洗掉杂物。使用吸管任意取 100 颗卵子，将之转入培养皿中。在光学显微镜下观察卵子是否受精，计算受精率。
1.9.3 存活率分析。随机选择 200 尾孵化出的真泥鳅鱼苗，饲养在直径 40 cm 的塑料圆盆中，以肥水 鸡蛋黄、肥水 卤虫幼虫或肥水 水蚤作为开口饵料，进行真泥鳅鱼苗饲养。受精后第 10 天统计真泥鳅鱼苗数量，计算存活率。
2 试验结果与讨论
2.1 HCG 对真泥鳅的催产影响
上述结果表明，在一定温度条件下（20℃～ 22℃），在一定的 HCG 剂量范围内，效应时间与 HCG 剂量呈正相关，但是催产率和受精率与 HCG 剂量无密切联系。
2.2 开口饵料对鱼苗存活率的影响
开口饵料对鱼苗的存活率影响详见图 2。饲喂鸡蛋黄试验组的存活率为 33.68%±1.82%，饲喂卤虫无节幼体试验组的存活率为 45.25%±1.54%，饲喂水蚤试验组的存活率为40.97%±1.25%。其中饲喂卤虫无节幼体试验组和饲喂水蚤试验组的存活率均显著高于饲喂鸡蛋黄试验组的存活率（p ＞ 0.05），这表明卤虫无节幼体和水蚤较鸡蛋黄更适合作为真泥鳅鱼苗的开口饵料。
图 2 3 种开口饵料对真泥鳅鱼苗存活率的影响分析
注：数值为 3 次试验的平均值 ± 标准差，不同字母代表差异显著。
卤虫无节幼体和水蚤较鸡蛋黄更适合作为真泥鳅鱼苗的开口饵料可能是因为：卤虫无节幼体和水蚤是活体，不容易导致水体恶化；卤虫无节幼体和水蚤含有丰富的动物蛋白，更符合真泥鳅鱼苗对各类氨基酸的需求。
