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三种固定化酶方法各自的优缺点(酶分子固定化常用的方法)

来源:原点资讯(m.360kss.com)时间:2023-10-27 06:16:38作者:YD166手机阅读>>

本章结合固定化漆酶和固定化Co(salen)两种催化剂的优点,采用一锅法催化技术,将固定化漆酶和固定化Co(salen)两种催化剂应用于木素的降解,同时,通过正交实验和单因素实验对反应条件进行优化研究,以找到最佳的固定化漆酶-固定化Co(salen)催化转化硫酸盐木素的工艺,提高木素降解的效率和单酚类产物的选择性,为木素催化转化高值化利用提供理论和技术参考。

实验与方法

实验原料与试剂

实验原料

实验研究中所用的硫酸盐木素为第三章所用木素。试验用催化剂为第二章制备获得,固定化漆酶酶活为936.7U/g载体,固定化Co(salen)中Co的含量7.14wt%。

主要试剂

18%过氧乙酸(Peracetlcacid,18%,CP)(乙溶液),购自广东光华化学厂有限公司;过硫酸钠(Sodiumpersulfate,AR),购自天津市化学试剂三厂;过硫酸铵(Ammoniumpersulfate,AR),购自天津市北方天医化学试剂厂;三氯甲烷(Trichloromethane,AR),购自成都市科隆化学品有限公司。

三种固定化酶方法各自的优缺点,酶分子固定化常用的方法(1)

其余主要试剂如第三章3.2.1.2所示。

实验仪器与设备

本章实验所涉及到的主要仪器设备如表4.1所示

三种固定化酶方法各自的优缺点,酶分子固定化常用的方法(2)

其他还涉及到烧杯(250mL、500mL)、锥形瓶(150mL、250mL)、真空抽滤瓶、坩埚过滤器和分液漏斗(150mL、250mL)等使用设备与器具。

实验方法

缓冲液的配制

缓冲液的配置如第三章3.2.3.1所示。

DMD溶液的配制

DMD(dimethyldioxirane)作为一种强的亲电氧化剂,目前,最有效、最常用的制备方法是利用过硫酸氢钾制剂与丙酮反应。

三种固定化酶方法各自的优缺点,酶分子固定化常用的方法(3)

DMD(dimethyldioxirane)的制备参照参考文献,丙酮和过硫酸钠按1:2的质量比于室温下反应制得,现配现用。

不同氧化剂下木素的催化转化处理

以第三章初步研究初选最优工艺为基础,分别以DMD(dimethyldioxirane)、O2、Na2S2O8、(NH4)2S2O8、CH3COOOH和H2O2为氧化剂进行一锅法催化氧化硫酸盐木素的实验,即,硫酸盐木素100mg,100mL缓冲液(pH为8.5),催化剂比例(固定化漆酶:固定化Co(salen),m:m)1∶4,催化剂用量8mg,相当于1.332g有效过氧化氢用量(相当于4mL30%过氧化氢)的氧化剂,室温(25℃)条件下反应3h,反应结束后,收集反应混合物,并在充分搅拌的条件下用40mL三氯甲烷萃取10min。

三种固定化酶方法各自的优缺点,酶分子固定化常用的方法(4)

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