无菌室一般为4- 5平方米、高2.5米的独立小房间(与外间隔离),专辟于微生物实验室内 ,可以用板材和玻璃建造。无菌室外要设-一个缓冲间,错开门向,以免气流带进杂菌。无菌室和缓冲间都必须密闭、室内装备的换气设备必须有空气过滤装置。在获得了无菌环境和无菌材料后,只有保持无菌状态,才能对某种特定的已知微生物进行研究。所以控菌能力和控菌稳定性是无菌室的核心验收指标。
一、无菌室设计规范:
1.二级及三级无菌室符合中华人民共和国卫生行业标准:WS233-2002《微生物和生物医学实验室 生物安全通用准则》。2.二级( P2 )无菌室为万级、局部百级,符合目前世界通用的美国联邦209E标准。二 级无菌室包含高、中、初效过滤系统，小型中央空调系统,层流送风,井式回风。更衣间及风淋室采用人体自动感应系统。
3.各系统技术指标如下:更衣间及操作间送风口风速≥0.3米/秒,风淋室风速215米/秒,操作间与环境静压差25Pa,系统噪声<60dB.
4.三级(p3 )无菌实验室除具有二级无菌室的特点外,还专门设立了电子互锁门、传递窗门互锁、环氧树脂自流平地面、下水消毒设施。配置二级生物安全柜,实验室及缓冲间均为负压空间,实验间的相对压强为-30Pa- --40Pa ,缓冲间的相对压强为-15Pa- - 20Pa。
二、无菌室设计要求:
1.工作室应矮小、平整,面积只需4米2左右,高2.2-2.3米,内部装修应平整、光滑,无凹凸不平或棱角等,四壁及屋顶应用不透水之材质,便于擦洗及*菌。
2.室内采光面积大,从室外应能看到室内情况。
3.为保证无菌室的洁净,无菌室周围需设缓冲走廊,走廊旁再设缓冲间,其面积可小于无菌室。
4.无菌室、缓冲走廊及缓冲间均设有8光灯及供消毒空气用紫外灯,*菌紫外灯离工作台以1米为宜, 其电源开关均应设在室外。
5.无菌室与缓冲间进出口应设拉门,门与窗平齐,门缝要封紧,两门应错开,以免空气对流造成污染。6.无菌室的使用与管理
1 )无菌室应保持清洁整齐,室内仅存放最必须的检验用具如酒精灯、酒精棉、火柴、镊子、接种针、接种环、玻璃铅笔等。
2 )室内检验用具及凳桌等保持固定位置,不随便移动。
3)每2 - 3周用2%石炭酸水溶液擦拭工作台、门、窗、桌椅及地面,然后用3%石炭酸水溶液喷雾消毒空气，最后紫外灯*菌半小时。
4 )定期检查室内空气无菌状况,细菌数应控制在10个以下,发现不符合要求时,应立即彻底消毒灭菌。无菌室无菌程度的测定方法:取普通肉汤琼脂平板、改良马丁培养基平板各3个(平板直径均9厘米),置无菌室各工作位置 上,开盖曝露半小时,然后倒置进行培养,测细菌总数应置37°C温箱培养48小时;测霉菌数则应置27°C温箱培养5天。细菌^霉菌总数均不得超过10个为。
5)无菌室*菌前,应将所有物品置于操作之部位(待检物例外) ,然后打开紫外灯*菌30分钟,时间一到,关闭紫外灯待用。
6)进入无菌室前,必须于缓冲间更换消毒过的工作服、工作帽及工作鞋。
7 )操作应严格按照无菌操作规定进行,操作中少说话,不喧哗,以保持环境的无菌状态。
三、无菌室消方法:
- 无菌室定期消毒用甲醛和高锰酸钾混合熏蒸:-般每平方米需40%甲醛10毫升、 高锰酸钾8毫升,进行熏蒸。使用时,先密闭门窗,量甲醛溶液盛入容器中、然后倒入量好的高锰酸钾，人员随之离开接种室,关紧房门,熏蒸20- -30分钟即可。
- 0. 1%升汞水消毒:用0.1%升汞水浸过的纱布或海绵进行指擦,或用喷雾器喷雾灭菌,使箱内的上下左右都沾上升汞水,手他可用升汞水消毒,并把袖子卷起来。喷雾后20~30分钟,箱内的杂菌和雾滴一起落到箱底被*死,内部的空气就变得很清洁。
- 紫外线照射灭菌 :在无菌箱中装一 支200伏、30瓦的紫外线灯 管;海次开20~30分钟 ,就能达到空间*菌的目的。 照射结束后,罩黑布半小时,以增强*菌效果。
- 石炭酸喷雾:在每次接种之前,用5%石炭酸溶液喷雾,可促使空气中的微粒和杂菌沉降,防止桌面微尘飞扬,并有*菌作用。
- 石灰揩擦:经常用药物熏蒸,易造成酸性环境,特别用甲醛和高锰酸钾熏蒸长久,污染往往越来越严重,预防办法可把各种药品交替使用。
